Diabetologia：激活但功能受损的心灵Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身突变到注意到1型号心血管疾病药理学患者的令人满意率在青少年时代就有很好的叙述，多个家兔自身突变白血病的青少年里面有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的青少年这一比率减低到84%。相极其之下，占药理学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的中风机制还没有取得充分的统计分析。

愈发多的人开始不应用于不应于系统来概念1型号心血管疾病的令人满意：性状在注意到多种家兔自身突变时进入第1阶段性，注意到皮质醇极其时进入第2阶段性，注意到患者时进入第3阶段性。一些多发家兔自身突变白血病的性状，在1期和2期，令人满意很比较慢，并发展为中风的1型号心血管疾病。我们在此之前叙述了三三组在首次测定到多种家兔自身突变核查后至少10年无心血管疾病的极比较慢令人满意者，这三组病患人数少，但特征极其明确。随后，我们推断出家兔自身复合物特异性CD8+T肝细胞自由基在令人满意快速的病患里面基本不普遍存在，但在未来会中风和仍然普遍存在的心血管疾病病患里面很容易测定到。这不太可能指出，与令人满意病患相极其，这些病患自身免疫自由基的减缓增强。

早期统计分析指出，尽管减缓性T肝细胞(Treg)量情况下，但心血管疾病病患普遍存在一些功能缺陷，其里面还包括对IL-2的自由基控制能力降低。此外，心血管疾病病患里面的物理现象CD4+T肝细胞不太可能对减缓更具抵抗性，观感为物理现象T肝细胞的减缓逼近，自然诱发的Treg和游离诱发的抑止Treg，以及复合物随之而来的CD4+T肝细胞里面IL-2自由基逼近。本统计分析的最终目标是叙述了CD4+减缓性T肝细胞(Treg)在一小群极快速令人满意者里面的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX统计分析是一项以人群为基础的纵向统计分析，在21岁以下确诊的病患亲属里面检查1型号心血管疾病的危险因素所。我们在此之前叙述了仍然快速令人满意者的特征，他们保持一致多重家兔自身突变白血病超过10年，但没有注意到心血管疾病的药理学患者，比较慢性或非完成性自身免疫。随后，10名再次保持一致无心血管疾病并愿意发放大量血清核查的快速令人满意者纳入T和B肝细胞功能统计分析。在目前的统计分析里面，8名比较慢令人满意者(SP三组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身突变白血病。所有的参与者都属于1型号心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身突变对某些复合物的白血病自由基，然而，一名病患已经属于2期至少6年，但没有注意到药理学患者，一名病患被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验核查时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里面对该丝氨酸完成了另行评估。受控外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞法术和T肝细胞减缓试验评估丝氨酸里面Treg的高频率、表观号和功能。不应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)完成无督导聚类统计分析，评估Treg表观号。

结果：与有益丝氨酸相极其，来自比较慢令人满意棒状的无意识CD4+T肝细胞的督导聚类标示出，激活的无意识CD4+ Treg高频率减低，与免疫抑制抑止的TNFR相关受体(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的病患与令人满意快速者和匹配的对照三组相极其，Treg谱有所不同。功能统计分析指出，与有益丝氨酸相极其，来自快速令人满意棒状的Treg肝细胞内的CD4+物理现象T肝细胞减缓明显受损。观感为对物理现象CD4+T肝细胞CD25和CD134传达的减缓减低。

上图1 深入的表观号统计分析标示出，CD4+Treg亚型号在比较慢令人满意队列里面减低。由FlowSOM聚合的Treg室，周围在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据记号物传达鉴定出10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)不应用于9个不同Treg记号聚合的10个元簇的MST。每个键值代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值三组周围上色。每个键值里面的饼上图坚称单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以标示出整棒状记号传达。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)聚合上图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的孔洞。(e-l)相比较数量级为每个metacluster装上图表(数量级> 0.05%)确定为HD和SP三组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。紫色红色代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩核查。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 不应用于CITRUS的预测模型号证实，Treg高频率的减低是令人满意快速的标志。分级依赖型(a - f)和甜菜统计分析(g-k)极其SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异性。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达完成受控，仿真FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及丝氨酸SP 606(紫色)里面CD25+ cd127的高频率统计上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型叔父集的装上图表;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值上色，箭头明显的簇被辨识为SP和HD队列之间的不同。(j)装上图表标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比较数量级(比率)。(k)直方上图标示出每个簇的表观号(黄色)和Treg记号相比较传达与背景传达(白色);上列，磁盘Treg_3;前面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇里面记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推字母秩核查

上图3 与有益献血者相极其，令人满意快速者无意识treg的GITR减低。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热上图(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达串接，标示出直方上图(c)和统计上图(d)。Wilcoxon类推字母秩和核查，p< 0.07(紫色)所有丝氨酸还包括，p< 0.05(白色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不还包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(紫色)串接，标示出直方上图(e)和统计上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推字母秩核查

上图4 来自快速令人满意的CD4+ treg肝细胞控制物理现象CD4+T肝细胞的控制能力降低。SP三组用白色的中央线和红色坚称，HD三组用红色的中央线和红色坚称，紫色的中央线/红色坚称丝氨酸sp606。不应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培育出3几天后完成流式肝细胞法术测定。(a-d)与CD4+需要的话者相比较不应的treg培育出(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育出。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。不应用于白血病对照(激活的响不应肝细胞包含treg)近似值减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重极其测试

上图5 物理现象CD4+T肝细胞对快速令人满意的T肝细胞再造的减缓更引人注意。SP三组用白色的中央线和红色坚称，HD三组用红色的中央线和红色坚称，紫色的中央线/红色坚称丝氨酸sp606。不应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel记号，treg按观察的比率起始。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培育出3几天后完成流式肝细胞法术(CD25反染)和特异性统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者联合培育出。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE减缓前年(b)。(c,d) CD25减缓前年(c)和CD134减缓前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重极其测试

结论：我们得出的结论是，来自快速令人满意叔父的再造无意识CD4+Treg在GITR传达里面取得了延展和丰富，突显了有利于统计分析Treg在1型号心血管疾病风险性状里面的异质性的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28